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數字PCR技術發展簡史

00 德宏傣族 | 2019年01月26日 07:11:49

1992年,Sykes等從非淋巴細胞和正常體細胞背景中鑒定突變的白血病細胞,檢測了復雜背景下低豐度的IgH重鏈突變基因。該研究中提出了三個重要的原則:有限稀釋、終點信號的有或無及對數據泊松分布的統計處理,為以后dPCR的發展奠定了基礎。

1997年,有研究利用玻璃毛細管作為載體進行PCR反應,可以對模板分子進行定量,驗證了Taq-Man探針可以檢測模板單分子,尤其在微小的反應體系中,發展了單分子定量技術,為dPCR單模板擴增提供了技術支持。

1999年,Bert Vogelstein和Kenneth W.Kinzler正式提出了dPCR的概念,可以將指數型函數轉化成線性函數,對模板進行有限稀釋,根據熒光信號的有或無進行精確定量。實驗利用384孔板對樣品進行稀釋、擴增,來檢測結、直腸癌糞便樣品中c-Ki-Ras基因突變,對數據進行泊松分布的處理。研究還提出了數字PCR的另外一個優勢,由于糞便樣本中含有大量的PCR反應抑制劑,通過對樣品進行稀釋,提高了對反應抑制劑的耐受程度。

2003年,Devin等提出了BEAMing技術,包括小珠(Bead)、乳濁液(Emulsion)、擴增(Amplification)、磁性(Magnetic)。利用包被鏈霉親和素的磁性珠子和生物素標記的寡核苷酸,形成微乳液,進行PCR擴增,通過流式細胞儀檢測熒光標記來進行計數,這個技術為以后微滴式dPCR的產生提供了技術依據。

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